Чем отличается ПЦР от посева

Содержание

Что лучше: бакпосев или ПЦР?

Многие пациенты, которым врач выдал направление сразу на несколько разных анализов, на форумах в интернете задают один и тот же вопрос: что лучше – ПЦР или бакпосев? Как правило, мотивом становится нежелание платить за оба исследования, ведь ожидания пациента заключаются в подтверждении либо опровержении присутствия инфекции в организме.

Вопрос о том, какое из названных исследований лучше, не совсем корректен – эти методы сильно отличаются. Бактериологический посев подразумевает под собой исследование биологического материала, помещенного в питательную среду, благоприятную для роста микроорганизмов. Так можно не только выявить типы бактерий, но и определить их чувствительность к антибиотикам.

Для определения различных микроорганизмов производится забор материала практически с любого участка организма. Так, материалами для бакпосева на микроорганизмы, вызывающие ИППП, выступают соскобы с половых органов и мазки из урогенитального тракта. Чаще всего бакпосев назначается для диагностики таких ИППП, как трихомониаз, микоплазмоз, уреаплазмоз, хламидиоз и различные формы кандидоза.

Анализ методом ПЦР (полимеразной цепной реакции) позволяет обнаружить в забранном у пациента биологическом материале фрагменты ДНК, принадлежащие тому или иному виду бактерий. ПЦР-анализ является самым высокоэффективным методом обнаружения множества микроорганизмов, так как даже самое низкое число клеток возбудителя инфекции будет обнаружено.

Помимо очевидных преимуществ, оба вида анализа обладают и явными недостатками. Для бакпосева характерна высокая длительность исследования (от нескольких дней до нескольких недель, так как бактерии нужно выявить, а затем и вырастить), повышенные требования к забору биологического материала, а также повышенные требования к квалификации лаборантов. Все эти недостатки ведут к главному неудобству — к значительному удорожанию стоимости исследования и удлинению сроков лечения.

Метод ПЦР-диагностики автоматизирован и позволяет выявить инфекцию за 4-5 часов. При этом неважно, в какой стадии находится заболевание, анализ обнаружит присутствие даже единичных бактерий либо вирусов. Кроме того, мазок методом ПЦР выявляет возбудителей хламидиоза, уреаплазмоза, микоплазмоза и генитального герпеса, которые не обнаруживаются в мазке на флору.

Минусы метода ПЦР – это вероятность получения ложноположительного результата, возникающая по нескольким причинам. Например, если пациент недавно вылечил заболевание, вновь определившееся при ПЦР-анализе, то вполне вероятно, что исследование обнаружило уже мертвые, но еще не выведенные из организма клетки возбудителя. Противоположный результат – невыявленный возбудитель, который был определен другим анализом – возможен, если вирус или бактерия уже успели мутировать, и штаммы ПЦР не среагировали на «незнакомца». Кроме того, врачи стараются не назначать ПЦР-анализ на гарднереллез, так как присутствие небольшого количества этих бактерий во влагалище является нормой, и ПЦР их все равно определит.

С усовершенствованием метода ПЦР врачи все реже назначают пациентам прохождение бакпосева. Он считается незаменимым при наличии хронических форм ИППП, так как позволяет достаточно точно определить количество клеток возбудителя и его реакцию на антибиотики различных групп. Для определения острых форм инфекции более целесообразным является метод ПЦР-анализа.

В конечном итоге, каким бы ни был результат того или иного исследования, достоверно расшифровать и сделать назначения по нему может только врач.

Диагностика инфекций: ПЦР, микробиологические посевы, антитела, АСЛО, анализ ликвора и спермы

Наша клиника уже много лет успешно лечит пациентов с инфекциями нервной, желудочно-кишечной и респираторной системы, урогенитальными инфекциями, инфекциями костей и суставов, а также с ревматическими процессами на фоне инфекций. Мы можем предложить Вам широкий спектр лабораторных исследований на инфекции, в т.ч. – серологическую диагностику (исследование антител к инфекциям).

  • Диагностика инфекций с помощью ПЦР. ПЦР – полимеразная цепная реакция
  • Микробиологические посевы
  • Антитела к инфекциям
  • Анализ на стрептококковую инфекцию. Антистрептолизин-О (АСЛО)
  • Анализ ликвора на нейроинфекции. Исследование цереброспинальной жидкости на вирусы, бактерии, грибы
  • Анализ спермы на вирусы, бактерии, грибы. Исследование секрета простаты и эякулята на вирусы, бактерии, грибы

Диагностика инфекций с помощью ПЦР. ПЦР – полимеразная цепная реакция

ПЦР или полимеразная цепная реакция — это метод исследования, на предмет наличия какой-либо инфекции путем поиска фрагментов ДНК этой инфекции.

Что можно проверить с помощью ПЦР. С помощью ПЦР можно исследовать различный материал: это кровь, кал, отделяемое глаз, носа, пунктат, биоптат, слюна, мазок, внутрисуставная жидкость, цереброспинальная жидкость. Т.е. биоматериалом для ПЦР-исследования может быть практически любая среда организма, где возможно присутствие микробов.

В чем отличие ПЦР от микробиологических посевов. В отличие от бактериологических посевов, ПЦР-исследование менее «капризно» к технологии выполнения. В ряде случаев ПЦР дает больше информации т.к. не каждый микроб растет на искусственных средах хорошо и бактериологические посевы часто получаются ложноотрицательными. Метод ПЦР чувствителен при диагностике туберкулеза, сифилиса, хламидий, микоплазм и других, плохо растущих на питательных средах инфекций.

Для интерпретации результатов ПЦР-исследования мы можем предложить Вам помощь врача-иммунолога, ЛОР врача, уролога, гинеколога, дерматовенеролога, офтальмолога или другого профильного специалиста.

В большинстве случаев, взятие биоматериала для ПЦР исследования производится врачом, но в некоторых случаях медсестрами.

Микробиологические посевы

Что такое микробиологический посев. Микробиологический посев – это исследование, при котором какой-либо биоматериал (кровь, моча, слизь, гной и т.д.) переносится из организма на питательную среду, и если в перенесенном биоматериале есть микробы, то они вырастают в этой среде. В ряде случаев мы совмещаем микробиологические посевы с ПЦР (полимеразная цепная реакция) исследованием, потому что не все микробы хорошо растут на средах, но легко выявляются методом ПЦР, и наоборот, некоторые микробы плохо определяются при ПЦР, но хорошо растут на питательных средах. Для определения вирусных инфекций широко применяется именно ПЦР.

Какие биоматериалы организма можно проверить на питательных средах. В нашей клинике вы можете выполнить посев практически любых биоматериалов: это отделяемое глаза и носа, материал полученный при пункции, слюна, различные мазки, мокрота, кал, моча, кровь, соскобы с кожи, волосы (при наличии инфекции волосяного покрова), ногти и др.

По готовности микробиологического посева может быть определена чувствительность высеянных микробов к различным антибиотикам. После определения чувствительности будет точно ясно, какой препарат будет подходить для лечения. Так же возможно определить чувствительность микробов к бактериофагам, в том случае, когда требуется проведение лечения без применения антимикробных химиопрепаратов.

Антитела к инфекциям

Что такое антитела? Антитела — это специфические белки, которые выделяет иммунная система в ответ на внедрение микроба в организм. Поскольку каждая разновидность грибка, вируса, бактерии, паразита имеют свою уникальную молекулярную антигенную структуру, то иммунная система вырабатывает антитела к каждому антигену каждого микроба. Обычно, в клинической практике, определяется несколько разновидностей антител к микробам (к вирусам, грибкам, бактериям): антитела IgA, IgM и IgG.

Антитела Ig G – эти антитела могут говорить, как о текущей инфекции, если она протекает длительно, так и о перенесенной инфекции. При повышении антител Ig G к любому микробу или вирусу всегда возникает вопрос, это перенесенная или текущая инфекция? На этот вопрос можно ответить с помощью других методов исследования, например, с помощью исследования IgM и IgA, а также с помощью других методов исследований, таких как ПЦР , микробиологический посев и т.д.

Антитела Ig M – это антитела иммунного ответа, которые повышаются при остром воспалении, т.е. при первичном попадании инфекции в организм, либо при обострении хронической инфекции. При обострении хронической инфекции, IgM повышается не всегда, это зависит от типа возбудителя, от давности воспалительного процесса, а также от особенностей иммунной системы пациента.

Антитела Ig A – это антитела, которые в основном повышаются при воспалительных процессах на слизистых оболочках. Они могут быть повышены как при острой, так и при хронической инфекции. Высокий уровень IgA к микробу или вирусу обычно отражает активное течение инфекции.

РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) – метод исследования близкий к определению антител, основанный на определении агглютинации (склеивание и выпадение в осадок) эритроцитов. РПГА часто используется для определения сальмонеллы, иерсинии, шигелл, бледных трепонем (сифилиса).
Использование других антител применяется при различных специфических инфекциях, например, при бруцеллезе, сифилисе, бореллиозе и других серьёзных инфекциях.

Иммуноблот и иммуночип – это определение большого количества антител к различным антигенам одного микроорганизма. Целесообразно исследовать иммуноблот или иммуночип в сомнительных случаях, когда инфекция протекает скрыто и, и её диагностика затруднена с помощью обычного исследования IgG, IgM, IgA. Например, иммуноблот и иммуночип, актуальны при диагностике бореллиоза, который может протекать скрыто и плохо диагностироваться, сифилиса и хеликобактерной инфекции.

Для чего нужно определять антитела к инфекциям? Определив количество и набор этих антител можно судить, контактировала ли иммунная система с данной инфекцией, есть ли сейчас контакт с данной инфекцией и есть у иммунной системы антитела к инфекции или нет. Полученные данные анализов используются для интерпретирования текущего состояния пациента и для постановки клинического диагноза, также эти данные используются для оценки проводимого лечения.

Анализ на стрептококковую инфекцию. Антистрептолизин-О (АСЛО)

то такое антистрептолизин О (АСЛО)? Антистрептолизин О (АСЛО) – это маркер стрептококковой инфекции в организме. При попадании в организм человека, стрептококк группы А начинает вырабатывать антиген (чужеродный для организма человека белок) – стрептолизин, а иммунная система, для защиты организма, начинает вырабатывать антитела к этому антигену – антистрептолизин О (АСЛО). Повышенный антистрептолизин О (АСЛО) говорит о перенесенной стрептококковой инфекции, о ревматическом заболевании, спровоцированном стрептококком, или риске ревматического заболевания. Обычно, по уровню АСЛО в крови можно определить, когда человек болел стрептококковой инфекцией: уровень антистрептолизина О увеличивается спустя 1 неделю после инфекции и достигает своего пикового значения через 4-5 недель. При хронической стрептококковой инфекции (чаще это хронический тонзиллит при неудовлетворительных результатах лечения) высокий уровень АСЛО может держаться месяцы и годы.

Что делать при обнаружении высокого антистрептолизина О:

  1. Обратиться к ЛОР-врачу (оториноларингологу), т.к. в большинстве случаев источник стрептококковой инфекции – миндалины или аденоиды. Правильное лечение хронического тонзиллита и аденоидита в большинстве случаев решает проблему повышенного АСЛО и ревматического риска.
  2. Получить консультацию врача ревматолога, возможно проверить органы-мишени ревматизма (сердце, почки, суставы, нервную систему).

Для чего нужен анализ на антистрептолизин О (АСЛО)? Анализ антистрептолизина О применяется для диагностики ревматологических заболеваний и их риска при стрептококковой инфекции. При лечении хронического тонзиллита от уровня АСЛО зависит тактика лечения. Уровень АСЛО в крови особенно важен для дифференциальной диагностики ревматизма и ревматоидного артрита (при истинном ревматизме антистрептолизин О повышается гораздо чаще и выше).

Где сдать анализ на антистрептолизин О (АСЛО)? В нашей клинике Вы можете сдать кровь на антистрептолизин О семь дней в неделю. Мы рекомендуем сдавать кровь утром натощак, а накануне, по возможности, избегать переедания.

Основные показания к анализу на антистрептолизин О (АСЛО):

  • Обследование на ревматизм, ревматоидный артрит и другие ревматические заболевания, ревматическое поражение сердца – миокардит и почек – гломерулонефрит
  • Хронический тонзиллит
  • Любая стрептококковая инфекция (рожа, отит, скарлатина и т.д.)

Анализ ликвора на нейроинфекции. Исследование цереброспинальной жидкости на вирусы, бактерии, грибы

Наша клиника специализируется в неврологии, нейроиммунологии и лечении аутоиммунных заболеваний нервной системы. Исследование ликвора на нейроинфекции – один из самых достоверных методов лабораторной диагностики воспалительных и аутоиммунных заболеваний нервной системы. Мы предложим Вам исследование ликвора на нейроинфекции в амбулаторном режиме, с пребыванием в палате дневного наблюдения. Подробнее о процедуре получения ликвора.

Ряд исследований на нейроинфекции можно выполнить и с помощью исследования крови:

Какие именно нейроинфекции доступны для исследования в нашей клинике:

Хламидия трахоматис / Chlamydia trachomatis ПЦР

Вирус простого герпеса 1 и 2 типов / Herpes simplex virus I, II ПЦР

Возбудитель сифилиса / Treponema pallidum ПЦР

Цитомегаловирус / Cytomegalovirus ПЦР

Вирус Эпштейн-Барр / Epstein Barr virus ПЦР

Вирус герпеса 6 типа / Human herpes virus VI ПЦР

Возбудитель туберкулеза / Mycobacterium tuberculosis complex ПЦР

Листерия / Listeria monocitogenes ПЦР

Токсоплазма / Toxoplasma gondii ПЦР

Микроскопическое исследование окрашенного мазка (бактериоскопия)

Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам

Посев ликвора на менингококк

Посев на грибы рода кандида и определение чувствительности к антимикотическим препаратам

Посев на анаэробную микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам

Посев на гонококк и определение чувствительности к антибиотикам

Серологическая диагностика клещевого боррелиоза методом иммуночипа (кровь + СМЖ)

Энтеровирус / PHK Enterovirus ПЦР

Вирус Варицелла-Зостер (возбудитель опоясывающего лишая) / Varicella-Zoster ПЦР

Аденовирус / Adenovirus (группы В, С, Е) ПЦР

Исследование ликвора помогает провести дифференциальную диагностику между нейроинфекцией и демиелинизирующим заболеванием, нейросаркоидозом, нейролейкозом и т.д. Исследование ликвора помогает диагностировать нейроборрелиоз в сомнительных случаях. Также возможно исследование ликвора на наличие олигоклональных антител Igg для диагностики рассеянного склероза.

Проведение люмбальной пункции. Люмбальная пункция – это метод получения ликвора для лабораторного исследования. Более подробную информацию о люмбальной пункции Вы можете узнать здесь.

Для выполнения люмбальной пункции нам могут понадобиться:

  • МР-томография головного мозга. Если у Вас есть снимки головного мозга давностью не более 3х месяцев, пожалуйста, принесите их в клинику. Это важно для Вашей безопасности: возможны риски.
  • Осмотр врачом неврологом. Врач, который будет делать люмбальную пункцию, должен точно знать показания к этому исследованию в Вашем случае и понимать возможные риски.

Анализ спермы на вирусы, бактерии, грибы. Исследование секрета простаты и эякулята на вирусы, бактерии, грибы

Наша клиника занимается диагностикой, лечением и профилактикой болезней мочеполовой системы. Анализ спермы и/или секрета простаты на инфекции – достоверный метод лабораторной диагностики воспалительных заболеваний мочеполовой системы. При простатите, везикулите, болезнях яичек, мужском бесплодии исследование спермы на инфекции более достоверно, чем обычный мазок или анализ мочи. Мы предложим Вам сдать анализ спермы на вирусы, бактерии и грибы 7 дней в неделю. .

Возможно исследование спермы методом ПЦР и бактериологического посева.

Какие именно инфекции доступны для исследования в нашей клинике:
ПЦР:

Кандида альбиканс / Candida albicans ПЦР

Хламидия трахоматис / Chlamydia trachomatis ПЦР

Цитомегаловирус / Cytomegalovirus ПЦР

Вирус Эпштейн-Барр / Epstein Barr virus ПЦР

Гарднерелла вагиналис / Gardnerella vaginalis ПЦР

Вирус простого герпеса 1 и 2 типов / Herpes simplex virus I, II ПЦР

Вирус герпеса 6 типа / Human herpes virus VI ПЦР

Микоплазма гениталиум / Mycoplasma genitalium ПЦР

Микоплазма хоминис / Mycoplasma hominis ДНК

Нейссерия гонореи / Neisseria gonorrhoeae ПЦР

Трихомонада вагиналис / Trichomonas vaginalis ПЦР

Уреоплазма парвум / Ureaplasma parvum ПЦР

Уреоплазма уреалитикум / Ureaplasma urealyticum ПЦР

Бактериологический посев спермы: любая бактериальная флора, поддающаяся культивации на стандартной питательной среде.

Расшифровкой результатов анализа спермы на инфекции, обычно, занимается врач уролог-андролог, дерматовенеролог или иммунолог. При необходимости, мы предложим Вам консультацию врача соответствующей специальности.

Исследование спермы на инфекции помогает выяснить причину хронических, рецидивирующих болезней мочеполовой системы. В некоторых случаях, после подтверждения вирусной природы хронического простатита и назначения адекватного лечения, можно добиться значительного прогресса в лечении болезни без хирургического вмешательства.

При обращении в нашу клинику с проблемой мужского бесплодия, мы рекомендуем сдавать анализ спермы на вирусы, бактерии и грибы. Наш опыт лечения мужского бесплодия показывает, что часто к бесплодию приводят инфекции мужских половых органов, включая цитомегаловирус и вирус герпеса 6 типа.

Где сдать анализ спермы на инфекции. Мы предложим Вам сдать анализ спермы на вирусы, бактерии и грибы 7 дней в неделю в нашей клинике.

Как сдавать сперму на инфекции. Перед сдачей спермы (эякулята) на исследование, рекомендуется половое воздержание в течение 3-5 дней. Собрать эякулят (сперму) для исследования на вирусы, бактерии и грибы Вы можете в комфортных условиях дома, в стерильный контейнер, который мы Вам выдадим. Важно доставить полученный образец эякулята в клинику в течение 4х часов.

Основные показания к сдаче спермы (эякулята) на вирусы, бактерии и грибы:

  • Простатит
  • Эпидидимит
  • Орхит
  • Бесплодный брак
  • Выявление мужского бесплодия с нарушением сперматогенеза
  • Хламидиоз, микоплазмоз, инфекция вирусами герпес-группы
  • Хронический цистит
  • Хронический уретрит
  • Хроническая тазовая боль
  • Подготовка к ЭКО (экстракорпоральному оплодотворению)

ПЦР: что это такое? Диагностика инфекционных заболеваний методом полимеразной цепной реакции

ВАЖНО!

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

В конце статьи см. словарь
Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году Кэри Мюллис (американский учёный). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является, одним из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).
В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.
Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.
Специфичность и применение
ПЦР — метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекций «золотым стандартом», проверен временем и тщательно апробирован клинически. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя.
ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП).
Также, этим методом проводят диагностику вирусных инфекций, таких как гепатиты, ВИЧ и др. Чувствительность метода значительно превосходит таковую у иммунохомических и микробиологических методов, а принцип метода позволяет диагностировать наличие инфекций со значительной антигенной изменчивостью.
Специфичность ПЦР при использовании технологии PCR даже для всех вирусных, хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно.
Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях.
Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике — для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ — вирусов папилломы человека; в пульмонологии — для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии — для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний — в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии — для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов.

Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами — короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 — 30 букв. Каждый из праймеров сопоставим (комплементарен) с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.
После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.
Проведение ПЦР
Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

  • ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
  • два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
  • термостабильная ДНК-полимераза;
  • дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
  • ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
  • буферный раствор.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции.
Ход реакции
Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 — 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий. Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 — 96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 — 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 — 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров.
Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 — 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии — 0,5 — 2 минут.
ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 — 15 мин.
Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию
Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой — позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.

Словарь
ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота — биологический полимер, один из двух типов нуклеиновых кислот, обеспечивающих хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов. Основная роль ДНК в клетках — долговременное хранение информации о структуре РНК и белков.
РНК– рибонуклеиновая кислота — биологический полимер, близкий по своему химическому строению к ДНК. Молекула РНК построена из тех же мономерных звеньев — нуклеотидов, что и ДНК. В природе РНК, как правило, существует в виде одиночной цепочки. У некоторых вирусов РНК является носителем генетической информации. В клетке играет важную роль при передаче информации от ДНК к белку. РНК синтезируется на ДНК-матрице. Процесс этот называется транскрипцией. В ДНК имеются участки, где содержится информация, ответственная за синтез трех видов РНК, различающихся по выполняемым функциям: информационной или матричной РНК (мРНК), рибосомальной (рРНК) и транспортной (тРНК). Все три вида РНК тем или иным способом участвуют в синтезе белка. Однако информация по синтезу белка содержится только в мРНК.
Нуклеоти́ды — основная повторяющаяся единица в молекулах нуклеиновых кислот, продукт химического соединения азотистого основания, пятиуглеродного сахара (пентозы) и одной или нескольких фосфатных групп. Нуклеотиды, представленные в нуклеиновых кислотах, содержат одну фосфатную группу. Они называются по содержащемуся в них азотистому основанию — адениновый (A), содержащий аденин, гуаниновый (G) — гуанин, цитозиновый (C) — цитозин, тиминовый (Т) — тимин, урациловый (U) — урацил. В состав ДНК входят 4 типа нуклеотидов — A, T, G, C, в состав РНК также 4 типа — A, U, G, C. Сахаром в составе всех нуклеотидов ДНК является дезоксирибоза, РНК — рибоза. При образовании нуклеиновых кислот нуклеотиды, связываясь, образуют сахаро-фосфатный остов молекулы, по одну сторону которого находятся основания.
Праймер – котроткая ДНК, используемая для репликации матричной цепи. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.
Литература

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

ПЦР: какие болезни помогает выявить и на чем основывается

Зачастую пациенты при обследовании у уролога, гинеколога, венеролога и врачей других специальностей получают направление на ПЦР. Что это такое, знают немногие. Разберемся, на чем основывается этот анализ, при каких заболеваниях назначается и как его сдать правильно, чтобы получить достоверный результат.

Что такое ПЦР метод

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — диагностический метод, который позволяет обнаружить в человеческом организме ДНК возбудителей заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП). Эта методика также применяется для установления отцовства, выявления наследственных патологий. Ее используют для экспериментов при клонировании и для определения новых генов.

Анализ ПЦР основывается на взятие различных жидкостей из организма в качестве биологического материала. Он позволяет увеличить количество ДНК на одном участке в 2 раза при помощи специальных ферментов. Благодаря этому удается получить больше информации для подтверждения присутствия патогенного микроорганизма в биоматериале. Это позволяет обнаружить даже скрытое заболевание.

У пациентов часто диагностируют ИППП методом ПЦР. Зачастую инфекции, передаваемые половым путем, протекают без выраженной симптоматики. Их возбудителей сложно выявить при помощи других исследований, т.к. они обладают низкой чувствительностью к патогенам. А ПЦР способна определить ДНК микробов в единичном количестве. Это невозможно сделать, например, при микроскопии и бактериологическом посеве.

1234

Показания к назначению ПЦР на ЗППП

ПЦР на ИППП назначается при возникновении симптоматики венерических заболеваний:

  • зуд и жжение в гениталиях;
  • проблемы с мочевыведением;
  • подозрительные выделения;
  • покраснение влагалища у женщин или полового члена у мужчин;
  • сыпь на гениталиях;
  • разрастание эпителия в шейке матки;
  • эрозии на половых слизистых;
  • воспаления в мочеполовой системе;
  • изменение цвета спермы при подозрении на ИППП у мужчин;
  • увеличение лимфоузлов в паху;
  • сбои в менструальном цикле;
  • выкидыши, патологии беременности, проблемы с зачатием;
  • киста яичников;
  • спайки в органах малого таза;
  • боли внизу живота;
  • простатит у представителей мужского пола.

ВАЖНО!!!Вне зависимости от того проявлялись ли перечисленные симптомы, обследование методом ПЦР на ИППП (инфекция, передающаяся половым путем) должны периодически проходить люди, которые ведут беспорядочную половую жизнь, а также женщины при планировании беременности и во время вынашивания плода. Как правило, врач выдает направление на ПЦР, когда уже сданы анализы ОАК и ОАМ, соскоб из уретры и цервикального канала для ИФА, микроскопии или бактериологии., но возбудителей определить не удалось.

Какие инфекции диагностируют методом ПЦР

Диагностика ИППП ПЦР позволяет обнаружить:

  • Хламидиоз и уреаплазмы. Первое заболевание провоцируют хламидии. Они ведут жизнедеятельность в уретре, кишечнике, шейке матки. Без должного лечения приводят к бесплодию. Второй возбудитель вызывает уреаплазмоз. Чаще всего эта болезнь протекает бессимптомно и становится причиной выкидышей.
  • ВИЧ, сифилис и нейросифилис. Последнее заболевание по симптоматике схоже с менингитом.
  • Герпес (простой ВПГ 1 и 2 тип).
  • Токсоплазмоз и краснуху.
  • Инфекционный мононуклеоз (ДНК вируса Эпштейн-Барр-ВЭБ).
  • Микоплазмоз. Мужчины чаще всего являются только носителями инфекции.
  • Трихомониаз. У представителей мужского пола чаще всего протекает бессимптомно или проявляется только жжение при походах в туалет «по-маленькому». У женщин зачастую бывает обнаружено сопутствующее заболевание — трихомонадный кольпит.
  • Кандидоз (молочница).
  • ВПЧ штаммы 16 и 18 (вирус папилломы человека). Есть в организме практически у каждого человека. Большинство штаммов не представляют угрозы, но есть и такие, которые могут привести к онкологии.
  • Цитомегаловирус. Обычно не провоцирует выраженную клиническую картину. Протекает в форме обычного ОРВИ.
  • Гонорея. Провоцирует желтовато-белые выделения с неприятным запахом.
  • Гарднереллез (бактериальный вагиноз). Клиническая картина схожа с молочницей.
  • Туберкулез, листериоз, хеликобактерную инфекцию.
  • Боррелиоз, клещевой энцефалит.

Как стало понятно, ПЦР анализ способен обнаружить возбудителей не только венерических заболеваний. Поэтому для постановки точного диагноза эту методику используют специалисты разных областей: урологи, гематологи, фтизиатры, гинекологи, гастроэнтерологи, онкологи, инфекционисты, венерологи.

Преимущества и недостатки ПЦР диагностики

ПЦР анализ на ИППП обладает такими преимуществами:

ПЦР анализ на ИППП обладает такими преимуществами: Высокая чувствительность и точность показаний. Если в биоматериале присутствует ДНК возбудителя даже в единичном количестве, диагностика его обнаружит. Быстрое получение результатов. На ПЦР можно производить любой забор биологического материала. Специфичность 100%. Во время исследования обнаруживают специфичный фрагмент ДНК, принадлежащий определенному патогену. Доступность метода. Для проведения диагностики не нужно специального дорогостоящего оборудования, поэтому ее делают во многих клиниках. Достаточно взять биоматериал один раз, чтобы обнаружить инфекцию. Анализ на ЗППП имеет и недостатки: вероятность ложного результата (хотя такое бывает крайне редко, но все-таки риск есть) если микроорганизмы мутируют, то обследование не выявит их ДНК (такое бывает крайне редко); чтобы обнаружить скрытые инфекции (например, трихомониаз или хламидиоз), бывает необходима стимуляция; процедура достаточно дорогостоящая (500-2000 руб.).

Достоинств у ПЦР диагностики ИППП значительно больше, поэтому ее очень часто используют в медицинской практике.

Как подготовиться к ПЦР исследованию на ЗППП

Перед диагностикой ИППП к ПЦР нужно подготовиться:

  • Обследование крови должно совершаться натощак. Запрещены и напитки, кроме небольшого количества питьевой воды.
  • За сутки нельзя пить алкоголь, курить, нужно снизить физические нагрузки и избегать стрессовых ситуаций.
  • За 2-3 дня до диагностики ИППП методом ПЦР отказаться от жареных и жирных блюд.
  • За 1-2 суток при сдаче мочи отказаться от интимной близости. Биологический материал собирать сразу после пробуждения.
  • При сдаче семенной жидкости за 4 дня не переохлаждать и не перегревать организм. За 2 суток не заниматься сексом.
  • Женщинам рекомендуется сдавать мазок ПЦР в последний день менструального цикла, когда еще есть незначительные выделения. Не вступать в половой контакт за 2 суток, не проводить гигиену гениталий за 3 часа.
  • При диагностировании сыпи берется соскоб. Перед ним за несколько дней нельзя использовать препараты местного назначения.
  • Не принимать антибиотики за 2-4 недели до сдачи мочи и другого биологического материала. Если отменить лекарства невозможно, сообщить об этом медицинскому работнику.
  • Накануне вечером перед сдачей анализа на ЗППП ПЦР гигиену половых органов осуществлять только водой, без использования гигиенических средств.

12345678

Выполнение этих правил необходимо для достоверного диагноза. Если точного результата нет, через сколько сдавать анализ повторно, решает врач.

Расшифровка результатов обследования

Такой анализ как ПЦР мочи и другого биологического материала бывает двух типов:

  • Качественным. Результаты в листке с анализом могут иметь отрицательное и положительное значение. В первом случае возбудитель не найден, а во втором обнаружен.
  • Количественным. Определяет число определенных патогенов. Значение 8х105МЕ/мл указывает на острую форму болезни, а 4х105МЕ/мл на процесс выздоровления.

Более точную расшифровку может дать только специалист.

Сдача ПЦР анализов после окончания антибиотикотерапии

После того, как пациент пролечился от заболевания, ему необходимо сдать контрольный анализ. Однако антибиотикотерапия может негативно отразиться на ПЦР. Дело в том, что частицы уже погибших патогенов еще некоторое время находятся в организме. ПЦР не сможет определить их жизнеспособность и даст ложный результат. Поэтому перед тем, как сдавать анализы, после прохождения курса лечения должно пройти минимум 4 недели.

Как часто сдавать ПЦР анализ на ЗППП, если ничего не беспокоит

При возникновении симптоматики заболеваний, которые диагностирует ПЦР, нужно сразу же сдать данный анализ. Также диагностика показана женщинам во время беременности, людям, которые имели за последние полгода двух и более половых партнеров. Анализ назначается и через месяц после окончания лечения ИППП, чтобы убедиться, что все патогены погибли.

ПЦР диагностика является предпочтительной при подозрении на ЗППП. Она позволяет не только выявить ДНК возбудителя, но и определить его количество. Благодаря этому врач сможет подобрать наиболее эффективную методику терапии, а значит, удастся избежать опасных осложнений.